1、母液的培养：先在开水中加入红茶、白糖(冰糖)少许，调成稀的红茶糖水，再略煮灭菌后，即盛入消过毒的玻璃杯中，冷却至35℃时，再加入一块如手指头大的红茶菌种，用洁净纱布封住杯口，三、四天后，杯底生出绿色纤毛，液面长出海蜇皮似的菌膜，再过几天，茶液变酸，味如杨梅汤，就制成了母液。
2、饮液的培养：在消毒过的大口瓶里，加进煮开的红茶糖水，冷却后，把母液加入，过一个星期左右，即发酵成酸甜茶液，即可饮用。茶液饮完，留下的菌母亦可继续如上法培养饮液，循环不绝。培养红茶菌的原料比例是红茶：糖：水=0.2：5：200。
3、菌种的培养：菌种的培养是在培养母液基础上进行。母液中生成的菌团有多层，下层较嫩而鲜，宜作菌种。良好的菌母会浮在液面，呈乳白色半透明胶质菌团，培养液气味为酸甜。如果菌团上呈红绿色即表示已受污染，培养液不能饮用。